外泌體轉運lncRNA-PTENP1抑制膀胱癌的進展
欄目:最新研究動態 發布時間:2019-05-22
即使外泌體能夠包裝長鏈非編碼RNA(lncRNAs)去調節細胞內的交流,但是外泌體lncRNA PTENP1在膀胱癌(BC)中的角色還不清楚......

福利双色球基本走势图 www.gbqemm.com.cn 即使外泌體能夠包裝長鏈非編碼RNA(lncRNAs)去調節細胞內的交流,但是外泌體lncRNA PTENP1在膀胱癌(BC)中的角色還不清楚。鑒于這一點,Jing Qian和Zhengdong Zhang等人帶領他們的團隊,研究了外泌體lncRNA-PTENP1在BC中的角色,并將研究成果于2018年10月3日發表在了Molecular Cancer雜志(IF=7.76)上。在本次研究中,作者首先檢測了PTENP1在BC和健康對照組的表達,發現PTENP1發生在組織和血漿外泌體中。通過ROC和AUC分析,作者評估了PTENP1的診斷準確度。為了決定外泌體PTENP1的功能,作者做了細胞表型和動物實驗。發現PTENP1在BC病人組織和BC病人來源的血漿外泌體中顯著下調;作者發現PTENP1主要被外泌體包裝。外泌體PTENP1在BC病人和健康對照組中不同。正常細胞分泌的外泌體PTENP1,并且能夠將其轉運到BC細胞中,因此通過細胞凋亡和降低細胞遷移和侵襲能力抑制BC細胞的惡性行為。在體內,外泌體PTENP1能夠抑制腫瘤生長。外泌體PTENP1能夠通過結合miR-17調節PTENP1的表達。因此,作者得出結論,外泌體PTENP1可以考慮作為BC治療的一個新的biomarker。來源于正常細胞的外泌體能夠將PTENP1轉運到BC細胞中,能夠在體內體外降低BC的緊張。在BC致癌過程中,外泌體PTENP1能夠參與正常細胞到膀胱細胞的交流。


技術路線

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實驗結果
1. 血漿外泌體lncRNA- PTENP1在膀胱癌中顯著,并且可以考慮作為膀胱癌的biomarker

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1 血漿外泌體PTENP1BC病人中的表達。

A. 外泌體的顯微圖片。B. WB檢測外泌體的marker(TSG和CD63)。C. qRT-PCR檢測外泌體PTENP1的表達。E. 在0、4、8、24h的血漿外泌體中PTENP1的表達。F. 外泌體PTENP1反復凍融0、2、4、8次后檢測外泌體PTENP1的表達。


2. 過表達PTENP1能夠抑制膀胱癌細胞增殖、遷移、侵襲 

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2 PTENP1BC細胞表型的效應。

EJ和J82細胞中轉染PTENP1表達質?;騈C載體。A. qRT-PCR檢測PTENP1在mRNA水平上的表達。B. CCK-8實驗檢測細胞的活性。C. 克隆形成實驗檢測細胞克隆形成能力。D. transwell實驗檢測EJ和J82細胞的侵襲能力。E. transwell實驗檢測EJ和J82細胞的遷移能力。F.流式細胞術檢測EJ和J82細胞的凋亡能力。G. 流式細胞術檢測EJ和J82細胞的細胞周期。


3. 膀胱癌細胞能夠攝取正常細胞分泌的外泌體

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3 外泌體PTENP1作為細胞內交流調節器。

外泌體從293A, J82和EJ細胞中分離。A. qRT-PCR檢測加入 RNase (2 μg/ml)和共同加入Triton X-100 (0.1%) 20min后,293A, J82和EJ細胞培養基中PTENP1的表達。B. 293A, J82和EJ細胞培養基中分離的外泌體的顯微圖片。C. WB檢測細胞系中的外泌體的marker(TSG101和CD63)。D. qRT-PCR檢測293A, J82和EJ細胞培養基中外泌體PTENP1的改變倍數。E. 293A細胞外泌體被PKH67標記后孵育J82和EJ細胞3h。


4. 過表達外泌體PTENP1能夠抑制膀胱癌細胞的增殖、遷移、侵襲

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4 外泌體PTENP1對膀胱癌細胞表型中的影響。

外泌體從轉染PTENP1表達質粒和NC載體的293A細胞中分離。293A細胞的外泌體分離后孵育EJ和J82細胞24h。A. CCK-8實驗檢測細胞的活性。B. qRT-PCR檢測PTENP1在mRNA水平上的表達。C. 克隆形成實驗檢測細胞克隆形成能力。D. transwell實驗檢測EJ和J82細胞的侵襲能力。E. transwell實驗檢測EJ和J82細胞的遷移能力。F.流式細胞術檢測EJ和J82細胞的凋亡能力。G. 流式細胞術檢測EJ和J82細胞的細胞周期。


5. 體內上調PTENP1或外泌體PTENP1都能抑制膀胱癌的發展

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5 在體內過表達PTENP1和外泌體PTENP1對腫瘤的影響。

過表達PTENP1和外泌體PTENP1轉染到EJ細胞中,命名為NC、PTENP1 vector。外泌體從轉染PTENP1/NC病毒載體的293A細胞中分離,命名為NC-Exos 、PTENP1-Exos。A. 接種NC, PTENP1-Exos, PTENP1 vector和NC-Exos后的裸鼠成瘤實驗。B. 接種NC, PTENP1-Exos, PTENP1 vector和NC-Exos后的異種移植實驗。C. 每兩天檢測腫瘤的體積。D. 每15天檢測終究得中重量。E. qPCR檢測接種NC, PTENP1-Exos, PTENP1 vector和NC-Exos后檢測裸鼠腫瘤中的PTENP1和PTENP的表達。F. HE染色和免疫組化分析ki67和PTENP在腫瘤組織中的表達。


6. PTENP1通過吸附miR-17上調PTEN的表達

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6 外泌體PTENP1通過miR-17調節PTEN的表達。

A. WB檢測轉染PTENP1表達質粒和NC載體的EJ和J82細胞中PTEN的表達。B. WB檢測轉染外泌體PTENP1和外泌體NC的EJ和J82細胞中PTEN的表達。C. miR-17結合PTENP的3’-UTR。D. WB檢測轉染外泌體PTENP1和miR-17 mimics的EJ和J82細胞中PTEN的表達。


7. 在膀胱癌細胞中,來自于轉染PTENP1載體的正常細胞中的外泌體PTENP1能夠提高PTENP1的表達

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7 外泌體PTENP1調節的膀胱癌進展的示意圖。

外泌體PTENP1通過ceRNA機制,吸附miR-17和調節PTEN的表達,進一步抑制膀胱癌的進展。